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重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定

日期:2014-10-11 00:00:00

近日,大连大学医学院研究人员发表论文,旨在构建重组人C反应蛋白(rhCRP)甲醇酵母分泌表达菌株,表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。研究指出,利用甲醇酵母表达系统,成功获得了较高纯度的具有免疫反应性的rhCRP,为下一步制备抗人CRP抗体及自主研发人CRP检测试剂提供重要的实验基础。该文发表在2013年第28期《重庆医学》杂志上。

 

将人工设计合成的rhCRP基因克隆到甲醇酵母表达载体pPICZαA上,经SacⅠ线性化得到重组质粒pPICZαA/rhCRP后转化至甲醇酵母X-33中,利用甲醇诱导进行分泌表达,并用组氨酸标签进行亲和层析纯化rhCRP。采用SDS-PAGEWestern blotting检测表达、纯化的目的蛋白,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和稳定性。

 

成功构建人CRP的重组甲醇酵母表达载体pPICZαA/rhCRP,重组酵母菌株成功诱导分泌表达23×103rhCRP;一步纯化即得纯度为90.42%的目的蛋白,间接ELISA法检测表明,纯化产物rhCRP具有特异的免疫反应性和一定的稳定性。

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