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重组蛋白和多肽的分离纯化

日期:2014-10-14 00:00:00

目前对于不同的亲和表达纯化系统的比较还不多,亲和纯化的选择还是多根据经验来确定,最近Lichty等以纯度、产率和花费为指标比较了几种亲和纯化标签的纯化效果,认为金属螯和亲和层析容量高,价格便宜,从大肠杆菌提取物中纯化组氨酸标签(His tag)融合蛋白的得率高,纯度中等,从酵母、果蝇和Hela细胞的提取物中得到蛋白的纯度就较低,对于钙调蛋白结合肽(CBP)融合蛋白,从大肠杆菌、酵母、果蝇提取物中纯化的纯度中等,而从Hela细胞提取物中能得到很好的纯度,基于表位的标签FLAGHPC(蛋白C重链)能从4种提取物中得到高纯度的蛋白,但使用的介质价格昂贵、吸附容量低,Strep tag Ⅱ标签融合可以在中等花费的情况下得到相对较好的得率和纯度(100),这方面的研究对于选择不同的亲和标签提供了很好的实验基础。

 

10-脱乙酰浆果赤霉素Ⅲ-10--乙酰转移酶(10-DABT)的表达纯化中,Fang等比较了GST系统、6×His系统和PinPoint系统对融合蛋白表达和纯化的影响,6×His融合蛋白在高浓度诱导物条件下的表达水平最高,但只有25% 的可溶性蛋白,一步纯化只得20%的纯度,GST融合蛋白表达水平低一些,可溶性蛋白却占了约80%,亲和层析后纯度为40%,可生物素化标签融合蛋白表达水平最低,可溶性蛋白只占40%,亲和层析后纯度60%,可见不同亲和表达纯化系统对上游、下游各个阶段的影响不一样,需要综合平衡考虑(101)

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