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生化自动分析仪项目间试剂的交叉污染及其避免方法

生化自动分析仪项目间试剂的交叉污染及其避免方法

  很多类型的全自动生化分析仪因其清洗系统的工作模式所致,一个项目对紧随其后的一个甚至几个项目的测定会带来一定程度的试剂污染,并且随着仪器使用时间的累加,仪器状况的下降,试剂交叉污染的程度会有所加剧。在实际工作中主要表现为某一项目的测定结果一直符合临床要求,可是一段时间以后测定结果趋高,并且日益明显;而单独测定该项目时测值又合理起来,给日常工作带来极大的不便。因此避免试剂间的干扰,变的非常重要。   试剂间的干扰有两个的原因:一是试剂中含有下一个测试所要测定的底物,或是含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用,因而直接干扰下一反应的测定结果;另一个则是该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来了间接的干扰,因为在有试剂污染的情况下,下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。下面通过对试剂成分的分析和相应试验来找出试剂交叉污染可能带来的情况,进而引导相应的项目调整和结果分析。   1 试剂间可能发生的干扰情况   1-1 ALT(IFCC)、AST(IFCC)试剂中含有高活力LD成分,有可能会对LD的测定带来干扰。   1-2 ALP(IFCC)、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)、CO2(PEPC)、α-Amy(EPS)等试剂中使用磷酸缓冲液,可能会对其后的Mg2+ 测定带来干扰。   1-3 ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、 α-HBDH(DGKC)等试剂使用磷酸缓冲液,可能会对无机磷的测定带来干扰。   1-4 CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)试剂中含有Glu成分,其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反应过程,因此可能对Glu测定带来干扰,尤其对Glu的HK法测定可能带来严重干扰。   1-5 Mg2+试剂 (Calmagite)中含有EGTA成分,为Ca2+络合剂,可能对Ca2+的测定带来干扰。   1-6 个别试剂以甘油做酶的保护剂,因此可能对TG的测定带来干扰,等等。   2 干扰的排查和发现   事实上各个企业所提供的产品说明书常不能够全面反映试剂组成的情况,因此通过实验发现试剂交叉污染可能带来的干扰变得相当重要。下面以两个试验来加以说明。   2-1 将某一试剂作为样本进行全套项目测定,考察结果的情况,进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。   2-2 1 份样本分为两份,一份加生理盐水或其他适当的稀释液,另一份加等量的试剂,同时测定、考察结果的变化,进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。进行这一实验时,使用半自动生化分析仪可能会得到更为理想的结果,尤其是针对双试剂反应时,R1、R2加入时机可以得到更为精确的控制。   此外,由于试剂成分的复杂多样性,实时仪器状况的独特性,可能发生的试剂间的交叉污染的情况不尽相同。   3 干扰的避免   试剂间的严重干扰会极大的影响测定结果的准确性,因此隔绝二者间的联系非常必要。一般在安排项目顺序时要求两个项目间至少要有一个非干扰项目,而最彻底的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前,以消除干扰发生的可能。同时要求检验人员对仪器的工作状态要了如指掌,并在一个样本的项目选择或一个样本的最后一项与下一样本的第一个项目选择时对于试剂交叉污染的可能性加以考虑,合理安排项目顺序,以便得到更为合理的结果。   通常情况下可以按照以下顺序安排项目:ALT 、AST、 ALP、γ–GT 、ChE 、TP、 Alb 、TBIL、 DBIL 、Urea、 UA 、Cr、 CK 、CK-MB、α–HBDH 、LD、 Glu 、TG 、TC、 HDL-C、 LDL-C、αpoAI、αpoB、 α–Amy 、CO2 、P3- 、 Fe3+ Ca2+ Mg2+、。   实际工作中,用全自动生化分析仪进行连续的多个项目的测定,每个反应的详细过程难以探知,因此理论分析结合实际应用可以摸索出一套符合本单位工作的方法。
发布时间: 2015-09-07
感染类项目分析:PCT(降钙素原)与CRP(C-反应蛋白)比较

感染类项目分析:PCT(降钙素原)与CRP(C-反应蛋白)比较

  一、降钙素原(PCT)   降钙素原(PCT)是血清降钙素(CT)的前肽物质,是由116个氨基酸组成的糖蛋白质,在正常生理情况下,由甲状腺C细胞分泌产生。健康人血液中的PCT浓度非常低,小于0.05ng/ml.在炎症刺激特别是细菌感染或脓毒血症状态下,机体各个组织、多种细胞类型均可产生PCT并释放进入血液循环系统。   1、 降钙素原适应症   ① 细菌感染与病毒感染的鉴别诊断   ② 帮助SIRS/脓毒症的早期诊断,评估疾病的严重程度及预后   ③ 抗生素治疗效果的评估,引导临床抗生素使用   ④ 手术和严重创伤患者细菌感染并发症监测   ⑤ 胰腺炎鉴别诊断   2、降钙素原临床意义   2.1细菌感染与病毒感染的鉴别诊断   病毒性疾病时PCT不增高或仅轻度增高,一般不会超过1-2ng,PCT鉴别病毒性疾病的敏感度和特异性均高于传统标记物(如C反应蛋白、白细胞,红细胞沉降率等)。   2.2用于脓毒症的诊断和鉴别诊断   2012年9月发表的《降钙素原PCT急诊临床应用的专家共识》(以下简称为“共识”)指出:脓毒症患者的PCT水平明显高于非脓毒症患者。且PCT升高对细菌感染导致的脓毒症特异性很高,可作为诊断脓毒症和鉴别严重细菌感染的生物标志物。同时,与单纯的临床检测标准相比,PCT检测可显着提高SIRS/脓毒症诊断的敏感性(97%)和特异性(78%)。把PCT加入诊断标准后,诊断准确率从0.77提高到0.94。   《共识》指出:PCT在SIRS/脓毒症、严重脓毒症和脓毒症休克患者的质量浓度依次增高,与病情的严重度呈正相关(见上图),目前PCT诊断脓毒症的界值水平为>0.5ng/ml.PCT<0.05ng/ml的患者患高风险细菌性感染的可能性非常小,PCT浓度从0.5ng/ml上升超过2ng/ml时,严重细菌感染或脓毒症的发生率增高,如果PCT值大于 2ng/ml甚至大于10ng/ml时,脓毒症、严重脓毒症或者脓毒症休克的可能性非常大(超过90%),高水平PCT表明全身炎症反应非常严重,死亡风险很高,应马上开始抗生素及针对性治疗。   2.3抗生素治疗效果的评估   监测PCT的变化趋势可以作为抗生素治疗效果的评估手段,PCT持续升高或者不降是治疗无效的表现。例如在严重社区获得性肺炎(SCAP)、院内获得性肺炎(HAP)以及呼吸机相关性肺炎(VAP)中,PCT水平与痰细菌培养阳性率、病情的严重程度呈正相关。初始PCT水平高并且在治疗过程中持续升高或不降是预后不良的标志。   2.4大手术和严重创伤患者细菌感染并发症监测   与细胞因子和其它炎性指标不同的是,在创伤和手术时血浆PCT浓度通常不升高或轻微的升高。没有细菌污染或内毒素释放的轻度创伤和小手术病人血浆PCT多处于正常范围之内,心胸外科手术出现轻微的升高,胃肠道手术及严重多发伤和烧伤病人血浆PCT通常在术后或伤后两天内出现暂时升高,但一般不超过2-3ug/L,推测这可能是肠道内毒素移位所致。若不并发细菌感染、脓毒症和MODS则很快下降。术后或伤后并发细菌感染,血浆PCT则一直保持高水平或持续升高,若感染和脓毒症得到根除和控制则很快下降至正常水平。   2.5胰腺炎鉴别诊断   国外学者把50例急性胰腺炎患者按水肿性、无菌坏死性和感染坏死性胰腺炎分成三组,并检测血浆PCT、IL-8和CRP浓度,结果发现感染坏死组平均PCT和IL-8明显高于无菌坏死组,而CRP在两组间无差别。水肿性胰腺炎组三种指标均最低。通过ROC曲线统计分析,预测感染性坏死胰腺炎的最佳分界值PCT为。8ug/L,IL-8为112ug/L,以此分界值为基准预测感染性坏死胰腺炎PCT的敏感性、特异性,准确度分别为94%、91%、92%,IL-8的敏感性、特异性、准确度分别为72%、75%、74%.相比之下,PCT与感染坏死性胰腺炎发生最为相关。   3降钙素原参考值   健康人的血浆PCT质量、浓度低于0.05 ng/ml。老年人、慢性疾病患者、以及不足10%的健康人血浆PCT质量浓度高于0.05 ng/ml,最高可达0.1 ng/ml,但一般不超过0.3 ng/ml.脓毒症患者PCT的诊断界值为超过0.5 ng/ml,严重脓毒症和脓毒性休克患者PCT质量浓度波动在5-500 ng/ml之间。极少数严重感染患者血浆PCT水平超过1000 ng/ml.   二、C-反应蛋白(CRP)   CRP是一种能和肺炎链球菌的荚膜C多糖结合,由5个相同的亚单位(23KD)以非共价键聚集形成的环状五聚体蛋白,分子量为115 KD,半衰期为19h,多由白细胞介素-6(IL-6)等炎性分子刺激肝脏细胞合成。正常人血清中CRP含量极微。近年相继采用胶乳增强的免疫比浊法等技术大大提高了分析的灵敏度(检测低限为0.005-0.10mg/L不等),用这些方法所进行测定的CRP称超敏或高敏CRP (英文缩写为hs-CRP)。   1、C-反应蛋白监测适应症   ①鉴别细菌感染与病毒感染   ②监控感病情变化及术后感染   ③预测心血管病危险   ④用于疾病的随访和监控疗效   2、C-反应蛋白临床意义   2.1 鉴别细菌感染与病毒感染   CRP是急性时相反应蛋白之一,在感染发生后6-8h开始升高,24-48h达到高峰。比正常值高几百倍,升高幅度与感染的程度呈正相关。病毒感染时,CRP不增高(除了一些严重侵袭导致组织损伤的病毒如腺病毒、疱疹病毒等)   2.2监控病情变化及术后感染,并用于抗生素疗效观察   CRP在血中升高的幅度与感染的程度正相关。有研究表明,术后6小时左右,CRP开始升高,如无并发症应在术后三天下降直至正常,如术后出现感染,则CRP长时间不下降;术前CRP升高者,术后感染率也远高于术前CRP不高者。对细菌感染作抗生素治疗时,动态检测CRP是必要的,它比临床体征更早作出并发症警报和治疗效果的判定,在粒细胞缺乏症或机体免疫状态抑制时更有临床意义。   2.3预测心血管病危险   持续的轻度CRP升高,说明有持续的炎症存在,可用于预测动脉粥样硬化的发生。有研究证实,与低水平CRP妇女相比,高水平CRP妇女患血管性疾病的危险度增加5倍,发生心梗或中风的危险度增加8倍。急性心肌梗死时CRP升高,在无溶栓治疗时与梗死范围呈正相关,在与梗死有关的冠状动脉完全堵塞时CRP更高。CRP可作为缺血性中风预后的独立预报指标,CRP大于10mg/L比小于10mg/L者危险性大得多。如CRP与总胆固醇、总胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇比值三者结合在一起更好的预知发生心肌梗死的相对危险度。   2.4 用于疾病的随访和监控疗效   在疾病发作后的六小时CRP含量即迅速升高,持续的时间与病程相仿,一旦疾病恢复,CRP含量迅速下降,对临床有一个先驱预报作用。若CRP持续升高或再度回升提示必须予以重视。为此,在病程中,作一系列CRP测定,对观察有否病情加重,呈现并发症和治疗监控等提供了有价值的信息。   3、C-反应蛋白参考值   感染性疾病:儿童和成年人90%<3mg/L,99%<10mg/L,10-99 mg/L提示局灶性或浅表性感染,≥100mg/L提示败血症或侵袭性感染等严重感染。敏感性达100%。   新生儿细菌性感染:一般新生儿血清CRP水平<2mg/L,大于此值即与细菌感染的严重程度有关。   用于心血管疾病危险性评估时:一般认为,hs-CRP<1.0mg/L为低危险性;1.0-3.0mg/L为中度危险性;P>3mg/L为高度危险性。   三、感染类项目分析   据研究,PCT与CRP临床符合性比较结果显示:PCT灵敏度=85%;特异度= 86.7%;总符合率=85.7%。PCT与CRP灵敏度=9O%;特异度=67%;总符合率=8O%。数据显示PCT和CRP在疾病灵敏度上差异不明显,但在特异性上PCT的特异性明显高于CRP。   CRP是一种急性反应蛋白,多种因素均可引起其升高,包括在心血管疾病中也会导致其升高,所以临床单凭CRP一项标志物,大大限制了辅助诊断作用。临床也需要更敏感、更特异的标志物来提高对重症感染和败血症的诊治。   PCT作为新的感染标志物,水平不受非感染因素影响。因此PCT对细菌感染的诊断价值明显高于WBC计数及CRP,是一项灵敏度好,特异性高的具有鉴别诊断意义的新指标。鉴别细菌性感染和非细菌性感染的能力明显的优于CRP,而且PCT还可以辅助临床诊断重症感染和败血症的需求。   PCT对细菌感染发生的局部感染或全身感染在临床引导上比CRP更具意义,CRP目前对全身感染有一定的敏感性,在针对局部细微感染其作用是受限制的。 PCT比CRP在抗生素治疗效果上更具有的引导性,PCT可避免抗生素乱用。   四、常用检测方法先容   ①CRP: 免疫比浊法、标记免疫测定法、POCT ②PCT:放射免疫分析法、免疫荧光法、双抗夹心免疫化学发光法、酶免法、POCT
发布时间: 2015-07-30
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